✅今日分享：感受态转化时，LB平板常见问题和解决方法（图1图2的总结～） ⚠️除此之外，还有涉及操作和一些常见的注意事项如下：（图片版本-图3）👇🏼 1. 进行无菌操作，避免外源菌和DNA的污染。 2. 所有操作均低温进行，感受态要在冰上放置，全程冰上操作。 3. 灭菌好LB培养基后，加入抗生素时要注意温度，在手可以触碰灭菌瓶时的温度时即可加入抗生素，避免过高温度导致抗生素失活。 4. 所使用的试剂和器皿都应具备高纯度，并进行灭菌处理，灭好菌4度保存。 5. 严格控制感受态的用量，质粒的用量，以提高转化效率，质粒100ng左右即可，感受态使用量建议看对应说明书，扩增质粒使用10-20ul，构建质粒使用50-100ul。 6. 做转化最好做阴性对照，即LB，空感受态分别涂板，以及空平板培养。 7. 加抗生素的LB平板4度保存一个月没问题；37度16h小时左右即失活，培养最好不要超过14h。 8.抗生素使用浓度：可100ug/ml，配制母液浓度为100mg/mL的储备溶液，使用时1比1000加即可。 （称量100mg抗生素粉末溶于1毫升水中，涡旋溶解，并过滤灭菌。） 9.对于细菌的长期储存，可选择甘油。 （菌液：甘油=4:1，长期储存于负80冰箱。）